一、傳代培養(yǎng)細(xì)胞染色體顯示法
 

　　1.培養(yǎng)細(xì)胞：取處于指數(shù)生長期、用較大瓶皿培養(yǎng)的、80%~90%匯合單層培養(yǎng)細(xì)胞。
 

　　2.加秋水仙素：使用最終濃度為0.02~0.8微克/毫升營養(yǎng)液，溫箱繼續(xù)培養(yǎng)6~10小時(shí)；或用低溫封閉法，把培養(yǎng)細(xì)胞置于4℃條件下6~12小時(shí)后，再于37℃溫箱繼續(xù)培養(yǎng)6~10小時(shí)處理(加秋水仙素)。
 

　　3.采集分裂細(xì)胞：可利用分裂中期細(xì)胞體變圓與底物附著不牢特點(diǎn)，此時(shí)手持培養(yǎng)瓶，左右反復(fù)橫向水平搖動(dòng)，令培養(yǎng)液在培養(yǎng)細(xì)胞表面反復(fù)沖刷。應(yīng)用此法可使90%的中期分裂細(xì)胞從瓶壁脫落，注意勿用力過猛，以防多量非分裂細(xì)胞脫落影響觀察。
 

　　4.離心：收集培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5~10分鐘。
 

　　5.低滲處理：吸除上清液、加入預(yù)溫至37℃的0.075M KCl溶液，在溫箱中靜置20~30分鐘。
 

　　6.預(yù)固定：向懸液中加新鮮1：3醋酸、甲醇固定液1ml，用吸管吹打調(diào)勻，此措施能起到先使細(xì)胞表面輕微固定，可防止固定后細(xì)胞粘連成塊。
 

　　7.固定：離心(同4)，吸除上清液，加新鮮固定劑5~10ml，加固定劑時(shí)要用一手微斜持離心管，另一只手用吸管吸取固定劑，把固定劑逐滴滴在離心管壁上，使之慢慢流入離心管中，然后輕輕吹打均勻，置15~20分鐘。
 

　　8.重復(fù)7，小心吸除大部分上清，據(jù)懸液中細(xì)胞密度大小，余下固定液0.5~1ml。
 

　　9.制片：用滴片法制片，徹-底洗凈載物片，勿留任何油脂，置冰箱中儲(chǔ)備備用。滴片前先從冰箱中取出冷載物片1片，在載物片表面出現(xiàn)細(xì)微水氣時(shí)，立即向片的一側(cè)滴2~3滴細(xì)胞懸液，滴片時(shí)的距離能保持半米高度。滴片后置室溫中令其自然干燥，或用吹風(fēng)機(jī)熱風(fēng)吹干亦可。如此制備好的標(biāo)本可置盒中備用或立即進(jìn)行染色觀察。
 

　　10.染色和封片：一般常用Giemsa染色：取干液Giemsa 1份加pH6.8磷酸緩沖液9份混合，染色10分鐘后，水洗、晾干、可直接觀察。如標(biāo)本需要保存或做長時(shí)間觀察，可過二甲苯兩次后，用中性樹膠封片后，再過二甲苯，然后封片亦可。
 

　　二、人末梢血微量全血培養(yǎng)染色體顯示法
 

　　1.培養(yǎng)液準(zhǔn)備：取15ml培養(yǎng)瓶數(shù)個(gè)，每瓶內(nèi)分別充入5ml培養(yǎng)液(pH 7.2)，內(nèi)含：1640培養(yǎng)液(含10%~15%小牛血清)，PHA 0.1ml，青霉-素100單位和鏈-霉素100微克/毫升 培養(yǎng)液。
 

　　2.抽血針管準(zhǔn)備：取2~5ml針管一支，在消毒后的無菌操作臺(tái)或無菌操作箱中安裝好注射器，無菌抽肝素(100 U/ml BBS)少許濕潤針管，如動(dòng)作迅速不用肝素亦可。
 

　　3.采血：用棉簽75%酒精給患者或獻(xiàn)血者的皮膚消毒兩次，縛止血帶，靜脈取血1~2ml。無菌操作迅速向每一瓶培養(yǎng)中加血0.4~0.5ml，如系外出采血，安裝針管及分裝血液兩步驟亦可在無菌條件略差的環(huán)境內(nèi)操作，但動(dòng)作要迅速，以減少污染；在采血量不多或不應(yīng)抽血的情況下，亦可在耳垂、手指肚(無名指)用刺血針采血。
 

　　4.培養(yǎng)和加秋水仙素：37℃溫箱中培養(yǎng)到60~72小時(shí)之間，此時(shí)細(xì)胞分裂相最多，向每培養(yǎng)瓶內(nèi)加秋水仙素，最終濃度0.02~0.08微克/毫升營養(yǎng)液，再培養(yǎng)4~6小時(shí)。
 

　　5.低滲：1000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，吸除上清液，加入預(yù)溫過的0.075M KCl溶液10ml，置溫箱中低滲處理15~20分鐘。
 

　　6.其余步驟與處理傳代細(xì)胞法相同。
 

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