您的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 勁馬生物|動(dòng)物血清的常見問題
技術(shù)文章
血清是細(xì)胞培養(yǎng)中的重要元素之一,在實(shí)驗(yàn)室操作中要注意及處理的方法:
1.血清的保存
血清應(yīng)保存在-5℃~-2O℃。若存放于4℃,請(qǐng)勿超過一個(gè)月。若無法一次用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
2.解凍血清的方法
將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。(融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻)
3如何處理血清解凍后的絮狀沉淀物
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但普遍原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會(huì)存在于血清中,也是造成沉淀物的主要原因之一,但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。
想要去除這些絮狀沉淀物,可將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。(不建議以過濾的方法去除絮狀沉淀物,因?yàn)榭赡軙?huì)阻塞過濾膜)
4.為什么要熱滅活血清
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。
5.做熱滅活有必要嗎
實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,大多數(shù)的細(xì)胞不需要。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或完-全沒有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懷遒|(zhì)量,造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成顯著增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)”,常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。(若非必要無需做此步驟,不但節(jié)省時(shí)間,也確保血清的質(zhì)量)
6.為什么儲(chǔ)存在冰箱中的胎牛血清會(huì)出現(xiàn)沉淀
胎牛血清沒有預(yù)老化,儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,不會(huì)影響血清的質(zhì)量。(推薦在-20℃儲(chǔ)存胎牛血清,避免反復(fù)凍融)
7.避免沉淀物的產(chǎn)生
?、俳鈨鲅鍟r(shí),按照所建議的步驟逐步解凍(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
?、诮鈨鲅鍟r(shí),請(qǐng)隨時(shí)搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
?、壅?qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
?、苎宓臒釡缁罘浅H菀自斐沙恋砦锏脑龆啵舴潜匾?,可以無須做此步驟。
?、萑舯仨氉鲅宓臒釡缁?,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。⑥溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增加。
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