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如何選擇Z佳的全血DNA、RNA提取方法？
更新時(shí)間：2010-03-09 瀏覽次數(shù)：3299
從全血中提取DNA和RNA應(yīng)該說(shuō)是zui基本的工作了，提取的DNA和RNA質(zhì)量的好壞直接影響了下游的實(shí)驗(yàn)和分析，可供選擇的方法非常多，亂花漸欲迷人眼，如何選擇的方法，成了很多人實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前zui難以抉擇的事情。我們從兩個(gè)方面，層層剝繭，分析*的實(shí)驗(yàn)方法。
1、 全血的采集保存和DNA的提取
I. 用 含抗凝劑的采血管進(jìn)行采血，抗凝劑一般有EDTA和肝素，EDTA更好一些，不會(huì)影響下游的反應(yīng)，如果沒(méi)有采血管，也可以自己添加抗凝劑EDTA，提前準(zhǔn) 備0.04M的EDTA溶液，每5ml的血液中加入0.4ml配好的EDTA溶液，顛倒混勻即可。保存于-20℃至-80℃，一般2-3年內(nèi)均可以提取，保存時(shí)間越短，提取的質(zhì)量越高，在2個(gè)月內(nèi)提取。
II. DNA提取方法的選擇：全血提取試劑盒一般有離心柱和溶液型兩種（比如Qiagen、 Promega、Bioteke；摒棄酚氯仿手提的方法，時(shí)間長(zhǎng)毒性大），原理及步驟基本相同。雖然各公司推出了N多型號(hào)，讓人不知如何去選擇，但從原理 和操作步驟看，基本就是離心柱和溶液型兩種。一般來(lái)說(shuō)，離心柱（DP1801）的提取純度高一些，但是處理量小（0.1-1ml）、得率略低；溶液型 （DP2101或DP2201）的提取量大（1-10ml）得率也高于離心柱。醫(yī)院的血液標(biāo)本一般在2ml以上，一般選擇溶液型的方法提取.在說(shuō)到國(guó)產(chǎn)和 進(jìn)口差別的時(shí)候，很多人以為進(jìn)口一定比國(guó)產(chǎn)的好，我們覺(jué)得沒(méi)有，只有更好！在不斷的進(jìn)行試驗(yàn)優(yōu)化之后，全血基因組DNA提取試劑盒DP2101或 DP2201開(kāi)創(chuàng)了第三代技術(shù)，不需要蛋白酶K消化，進(jìn)口的都是要借助蛋白酶K的??！DP2101或DP2201減少了蛋白酶K現(xiàn)配現(xiàn)用的麻煩和消化的時(shí) 間，而且提取量和穩(wěn)定性更好。
III. 非抗凝血（凝固血）能否提取？答案是肯定的，而且一點(diǎn)都不麻煩，提取效果和抗凝血沒(méi)有差別！在你找遍了進(jìn)口的所有品牌都找不到后，回過(guò)頭來(lái)您才發(fā)現(xiàn)原來(lái)他就在身邊，百泰克的凝固血基因組DNA提取試劑盒已經(jīng)有很多忠實(shí)的用戶(hù)。
2、 全血RNA如何提取
I. 全血RNA提取過(guò)程哪些是RNA降解的因素？
全血中RNA酶是非常豐富的，RNA在沒(méi)有保護(hù)的狀態(tài)下很 容易降解！哪些是狀態(tài)RNA不受保護(hù)呢，比如紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞的過(guò)程，紅細(xì)胞裂解液是低濃度的平衡鹽溶液，沒(méi)有抑制RNase的成份，這時(shí)候RNA 不受保護(hù)；DNA酶消化的時(shí)候RNA也不受保護(hù)，這個(gè)時(shí)候也沒(méi)有抑制RNase的成份。
II. 什么樣的提取方法更好？
我們?cè)谶x擇方法的時(shí)候要傾向于對(duì)RNA全程有保護(hù)的方法！一般的方法都是先用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，然后從白細(xì)胞提取核酸，還要經(jīng)過(guò)DNA酶的消化去除DNA，這種并不是的方法，過(guò)程中有很多RNA降解的因素。所以直接裂解法是的方法，將采集的血液迅速加入3倍體積的裂解液RLS——血液（液體樣本）總RNA快速提取試劑盒（離心柱型）的裂解液，迅速顛倒混勻。裂解液RLS含有強(qiáng)烈的蛋白變性劑，能迅速變性蛋白，是RNase變性，不能對(duì)RNA降解。裂解后的混合液還可以用來(lái)運(yùn)輸，以避免RNA降解，這個(gè)方法成為博奧生物制作表達(dá)譜芯片RNA運(yùn)輸和提取的推薦方法
農(nóng)藥、除草劑、各種污染物、人工合成物等異生物質(zhì)，對(duì)環(huán)境和土壤微生物的多樣性、種群變化產(chǎn)生明顯影響；轉(zhuǎn)基因作物是否發(fā)生土壤基因轉(zhuǎn)移的檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因作物的安全性評(píng)價(jià)等
方面的研究，都需要準(zhǔn)確的提取高質(zhì)量的DNA進(jìn)行檢測(cè)！
土壤中可培養(yǎng)的微生物可能不及所有微生物總數(shù)的0.3%，常規(guī)提取DNA的方法很難提取到DNA，很難把土壤中的腐殖酸去除干凈，而微量的腐殖酸就可能導(dǎo)致PCR失敗。
目前上商用的試劑盒雖然能提取到土壤中微生物的DNA，但由于破碎方法采用玻璃珠或者鋼珠破碎，導(dǎo)致基因組斷裂嚴(yán)重，影響DNA質(zhì)量；第二，由于必須購(gòu)買(mǎi)破碎的破碎機(jī)或振蕩器，增加其使用成本；第三，其試劑盒為了保證DNA純度，采用了包括玻璃奶、離心吸附柱串聯(lián)的純化方式，導(dǎo)致了DNA大量的損失，得率很低，很難真正反映出土壤中微生物的多樣性。
百克推出的土壤基因組DNA快速提取試劑盒（DP4001）采用創(chuàng)新技術(shù)，摒棄了機(jī)械破碎細(xì)胞的方法，采用酶法破碎，保證了基因組的完整性，摒棄了玻璃奶、離心吸附柱串聯(lián)純化DNA的方式，極大的提高了DNA的得率，幾乎土壤中所有的微生物DNA都能提取出來(lái)，能真正反映土壤中微生物的多樣性！
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