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13817140470更新時(shí)間:2013-10-22 瀏覽次數(shù):2009
上海勁馬何于昨日親臨公司實(shí)驗(yàn)室,與我司科研人員共同進(jìn)行人α乳清蛋白ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)結(jié)束后何就實(shí)驗(yàn)中如何降低ELISA背景的問(wèn)題闡述了自己的觀點(diǎn)和看法:
洗滌很重要
洗滌步驟看似很無(wú)聊,其實(shí)很重要,因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)殘留在微孔板中,那么它會(huì)增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過(guò)高,可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
封閉更關(guān)鍵
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過(guò)高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。
如果您一直被背景問(wèn)題所困擾,那么也許您該花些時(shí)間來(lái)優(yōu)化封閉液。這可能需要時(shí)間,但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個(gè)因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。
檢測(cè)試劑要適量
另一點(diǎn)也很顯而易見(jiàn):切勿使用過(guò)多的檢測(cè)試劑。如果濃度過(guò)高,或者未正確稀釋,則會(huì)導(dǎo)致高背景。也不要顯色過(guò)度,如有必要,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。
以上是上海勁馬何為您講解的關(guān)于ELISA試劑盒在實(shí)驗(yàn)中背景過(guò)高的處理方法,如果您還有什么疑問(wèn)可來(lái)電向我們咨詢,我們將一一為您解答。
上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)及銷售,并代理銷售二十多個(gè)國(guó)外,致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供*的科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù),滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué) 、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生物科技實(shí)驗(yàn)需求。
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