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13817140470更新時(shí)間:2013-11-25 瀏覽次數(shù):2539
許多科研愛好者們?cè)谧?strong>ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)總會(huì)碰到各種各樣的問題,那么為了避免問題再次困擾到您的實(shí)驗(yàn),上海勁馬今天要為您介紹的是:ELISA試劑盒基礎(chǔ)知識(shí)問答普及篇。
問題:ELISA加樣時(shí)如何防錯(cuò)?
解決方案:
(1)用一張寫滿字的紙,字越多越好,比如報(bào)紙,墊在下面,這樣,加過標(biāo)本的小孔看過去下面的字會(huì)變小,沒加的字正常,非常容易區(qū)分。
(2)可以利用液面反光與沒有加的孔加以區(qū)別
(3)在標(biāo)本加完后,再把加樣槍全壓下,使液面產(chǎn)生小氣泡,可以區(qū)分
問題:如何正確使用酶結(jié)合物?
解決方案:
1.酶結(jié)合物的稀釋液
在稀釋液中常加入高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)(例如1%BSA或5%脫脂奶粉),通過競(jìng)爭(zhēng)抑制酶結(jié)合物在固相載體上的非特異性吸 附。一般還加入能夠抑制蛋白質(zhì)吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑,如吐溫20(0.05%的濃度較為適宜)。
2.正確稀釋酶結(jié)合物
酶 結(jié)合物的合適工作濃度需要通過預(yù)實(shí)驗(yàn)來確定,濃度過高易導(dǎo)致本底偏高,濃度過低則會(huì)導(dǎo)致陽性信號(hào)的減弱。
酶結(jié)合物在使用前稀釋,稀釋后的酶 結(jié)合物不宜長(zhǎng)期保存,因?yàn)榈蜐舛鹊拿附Y(jié)合物極易失活。
問題:血清如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
解決方案:
1、解凍血清時(shí),請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。C至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20。C至37。C),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
2、解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生
3、請(qǐng)勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
5、若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56。C,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。 [5]血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過濾膜。
關(guān)于上海勁馬為您介紹的以上部分解決方案對(duì)您的實(shí)驗(yàn)是否有所幫助呢?如果您的ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)還有其他疑問,請(qǐng)登錄我司留言或咨詢我司在線工作人員,我們將一一為您解答。
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