至今為止，抗原修復(fù)有許多種方法，在這些方法中，有的是根據(jù)抗體的要求來進(jìn)行，有的是根據(jù)抗原的表達(dá)程度來進(jìn)行，我們則對(duì)每種病例每項(xiàng)檢測(cè)，都要求必須進(jìn)行抗原修復(fù)，以達(dá)到抗原全面表達(dá)的*狀態(tài)。以下是上海勁馬生物總結(jié)出來的具體抗原修復(fù)方法。
（1）物理化學(xué)試劑抗原修復(fù)法。
1. 真空負(fù)壓抗原修復(fù)法：
① 切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇真空負(fù)壓處理5分鐘。
③自來水洗，蒸餾水洗。
④0.01M檸檬酸鹽緩沖液（PH6.0），真空負(fù)壓干燥箱預(yù)先調(diào)至95℃，真空負(fù)壓處理10分鐘。
⑤待修復(fù)注降至室溫的一，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。
2.微波輻射抗原修復(fù)法：
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理10分鐘。
③自來水洗，蒸餾水洗。
④ 0.01M檸檬酸鹽緩沖液（PH6.0），于微波爐內(nèi)微波輻射10分鐘，如檢測(cè)Er和Pr則需要20輻射分鐘左右。
⑤待修復(fù)液降至室溫后，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組織化學(xué)的染色方法進(jìn)行染色。
3.高壓抗原修復(fù)法：
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來水洗，蒸餾水洗。
④切片放入抗原修復(fù)液中，邊同容器放入高壓鍋中加熱至沸騰。蓋上壓力閥至噴汽后持續(xù)1－4分鐘。
⑤待修復(fù)液恢復(fù)至室溫后，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組織化學(xué)染色方法進(jìn)行染色。
4.隔水熱抗原修復(fù)法：
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來水洗，蒸餾水洗。
④切片放入0.01M檸檬酸鹽緩沖液（PH0.6）中，邊同容器一起放入水溶鍋中加熱，其間應(yīng)不斷用溫度計(jì)測(cè)其溫度，待抗原修復(fù)液的溫度達(dá)到有效溫度后（92℃↑）。即開始計(jì)時(shí)，持續(xù)40分鐘。
⑤待抗原修復(fù)液恢復(fù)至室溫后，PBS洗3次，隨后按選定好的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。
5.電爐加熱抗原修復(fù)法：
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來水洗，蒸餾水洗。
④ 將切片放入抗原修復(fù)液中于電爐上加熱，不時(shí)用溫度計(jì)測(cè)量溫度，當(dāng)達(dá)92℃后，即可拔離電源，當(dāng)溫度低于92℃時(shí)，再插上電源，如此反復(fù)持續(xù)至10分鐘左右。
⑤待抗原修復(fù)液降至室溫后，PBS洗3次，隨后按選定的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。
對(duì)各種抗原修復(fù)方法的評(píng)價(jià)。
1.真空負(fù)壓抗原修復(fù)法：
這是一種操作簡(jiǎn)單，效果特佳，溫度恒定，能一次性處理大量切片的方法。該法的zui大的特點(diǎn)有四：一是各物質(zhì)的分子在失重的情況下四處飄游，增加各分子間的碰撞機(jī)會(huì)；二是有恒定的溫度，既能使甲醛固定的蛋白發(fā)生變性，又不需要使抗原修復(fù)液達(dá)到沸騰，不會(huì)導(dǎo)致切片因抗原修復(fù)液的沸騰而離開載片，保證了染色的成功率，減少了因掉片而反復(fù)制片的麻煩，保證了病理報(bào)告的及時(shí)發(fā)生，為病人爭(zhēng)取更多的時(shí)間；三是不受條件限制，不管是金屬性的不是非金屬的都可以進(jìn)行操作；四是可以一次性制作大批的切片。
2.微波輻射抗原修復(fù)法：
該法與上法相比，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，都不分上下。它是利用微波每秒以24億5千萬次的快速運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生瞬間熱。當(dāng)然，光靠微波的作用是不夠的，還必須依靠熱的作用，方能達(dá)到目的。應(yīng)用微波輻射，它有雙重作用，微波輻射可以使各物質(zhì)分子作極性運(yùn)動(dòng)。促進(jìn)形成的醛鍵斷裂開。分子間運(yùn)動(dòng)所產(chǎn)生的瞬間熱，當(dāng)達(dá)到有效的溫度后，就可導(dǎo)致甲醛固定后的蛋白的變性。該法的特點(diǎn)是：產(chǎn)熱迅速，容易操作，也容易引起抗原修復(fù)液的沸騰，使用微波爐時(shí)禁止使用金屬性的器皿，以防引起失火或爆炸。
3.高壓抗原修復(fù)法：
該法高壓和高熱來促進(jìn)醛鍵的斷裂，當(dāng)加熱至開鍋，加上高壓閥后，汽體噴出，此時(shí)的溫度已達(dá)121℃左右。該法被應(yīng)用于一些較難修復(fù)的抗原，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)認(rèn)為，該法效果不錯(cuò)。
4.隔水熱抗原修復(fù)法：
該法應(yīng)用隔水熱方法，效果不及前面三種方法，它需要較長(zhǎng)時(shí)間的熱的作用，在早期應(yīng)用于Er和Pr染色的抗原修復(fù)時(shí)，我們的修復(fù)時(shí)間為40分鐘，如果達(dá)不到這時(shí)間，效果將不理想。
5.電爐加熱抗原修復(fù)法：
該法是在沒有上述的設(shè)備時(shí)才選用的一種方法，當(dāng)然效果是zui差的，因?yàn)樗皇菃慰繜岬淖饔?，這是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，另外，電爐加熱必須常用溫度計(jì)來測(cè)量溫度，對(duì)其溫度不好控制，有時(shí)需要多次關(guān)閉電源來維持所需的溫度。

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