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13817140470更新時(shí)間:2015-01-22 瀏覽次數(shù):2689
elisa實(shí)驗(yàn)的使用目的概述
酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay 簡稱ELISA)是在免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic techniques)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù),ELISA過程包括抗原(抗體)吸附在固相載體上稱為包被,加待測抗體(抗原), 再加相應(yīng)酶標(biāo)記抗體(抗原),抗原(抗體)--待測抗體(抗原)--酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物,再與該酶的底物反應(yīng)有色產(chǎn)物。借助分光光度計(jì)的光吸收計(jì)算抗體(抗原)的量。待測抗體(抗原)的定量與有色產(chǎn)正比。
根據(jù)勁馬多年的研究經(jīng)驗(yàn)指出ELISA可以用來檢測血清樣本,看有還是沒有某個(gè)抗原或抗體,也可以看該抗原或抗體是多還是少,可以比較不同血清樣本之間該抗原/抗體的含量高低。
如果該抗原是一個(gè)病原,或該抗體是一個(gè)對某病原具有特異性的抗體,則ELISA檢測該抗原或該抗體的結(jié)果,可以用來幫助判斷,提供血清的個(gè)體,是否感染或曾經(jīng)感染過這個(gè)病原。
ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的不公平競爭等因素的影響,結(jié)果重復(fù)性較差,質(zhì)量較難控制。
不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量*一致,即使是通過批批檢的項(xiàng)目其檢測結(jié)果也存在差異,因此必須選擇和訂購長批號(hào)的試劑,并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性;對于效期短、使用率低的試劑,應(yīng)當(dāng)小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。
標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等,后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。
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