上海勁馬生物從事Elisa試劑盒檢驗(yàn)銷售以有七個(gè)年頭了，為您廣大客戶更好的掌握Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)技巧，我司例舉了一些在實(shí)驗(yàn)中需要遵守一些規(guī)則，讓大家更好地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，取得較好的實(shí)驗(yàn)成果。Elisa方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。在Elisa測定中影響因素較多，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。引起ELISA測定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：標(biāo)本因素；試劑因素；操作因素。1．樣品稀釋 一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗(yàn)確定，以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。2．試劑盒平衡 Elisa中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫(約25℃)，一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時(shí)間太短會(huì)造成試劑混勻不夠，樣品孵育時(shí)間相對(duì)縮短，ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。 

一個(gè)良好的實(shí)驗(yàn)操作環(huán)境可以保證ELISA試劑盒測定結(jié)果更準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)操作的嚴(yán)謹(jǐn)性與實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范密不可分，未使用的試劑應(yīng)儲(chǔ)存于2-8℃，使用時(shí)應(yīng)回溫到室溫（20-25℃）。切忌不同批次的試劑混合使用，要經(jīng)常檢查酶標(biāo)儀和微量移液器的精度盒準(zhǔn)備度，這樣才能保證實(shí)驗(yàn)的可操作性。

3．樣品和試劑的混勻
在稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗(yàn)的均一性。

4．加樣
加樣是一項(xiàng)很重要的步驟。加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。

5．溫育
溫育是ELISA測定中影響測定成敗zui為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。

6．洗板
固相免疫測定技術(shù)是一種非均相免疫測定技術(shù)，需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過程中吸附的非特異成份分離開來，以保證ELISA測定的特異性。洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及時(shí)更換吸水紙，尤其是拍過酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果。

7．顯色
顯色一定要控制時(shí)間,根據(jù)試劑盒說明操作即可。一般來說，顯色時(shí)間過短，結(jié)果偏低；顯色時(shí)間過長，空白增高或者非特異性顯色增加。

8．比色
比色要注意波長的選擇。以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，而前者比色波長為450nm，后者為492nm，濾光片需根據(jù)要求隨時(shí)更換。因此，容易出現(xiàn)濾光片錯(cuò)用的問題。