酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA) 技術(shù)從1970年代發(fā)展至今已近半個(gè)世紀(jì)，是一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室zui基本的免疫檢測(cè)技術(shù)，被廣泛的應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床檢驗(yàn)。那么面對(duì)市面上數(shù)以千計(jì)的試劑盒，數(shù)百家供應(yīng)商，對(duì)于剛進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的新手或者準(zhǔn)備開展ELISA實(shí)驗(yàn)的人員， 又該如何選擇且質(zhì)量又可靠的ELISA試劑盒呢？

不要急，本文“勁馬生物”將為您提供*的八條黃金法則！仔細(xì)閱讀八條，保您實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)精彩呈現(xiàn)。

1. 首先選定ELISA類型

ELISA技術(shù)可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。ELISA方法中有三個(gè)必要的試劑：(1) 固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；(2) 酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"（conjugate）；(3) 酶反應(yīng)的底物。

一般可將ELISA分為以下幾種類型，實(shí)驗(yàn)君首先需要根據(jù)自己的待檢物來確定試劑盒類型。

1)    雙抗體夾心法：針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相捕獲抗體和酶標(biāo)檢測(cè)抗體。適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原如血漿中的細(xì)胞因子，不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原。同理，也有雙抗原夾心法測(cè)抗體。

2)    直接法：將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一抗，即可測(cè)定抗原總量。此法操作手續(xù)簡(jiǎn)短，因無須使用二抗可避免交互反應(yīng)。

3)    間接法：間接法是檢測(cè)抗體常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）來檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的待檢抗體。

4)    競(jìng)爭(zhēng)法：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測(cè)特異性抗體。

2. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)物種及待檢樣品性質(zhì)來選擇ELISA

如果實(shí)驗(yàn)君的實(shí)驗(yàn)樣品為人、小鼠或大鼠樣品，那么要選擇一個(gè)合適的試劑盒相對(duì)容易，但如果您的實(shí)驗(yàn)樣品來源于其他物種如雞、牛、猴等，則市面上能提供的試劑盒種類卻很少。且不可輕信能提供近萬(wàn)種試劑盒，覆蓋多物種的供應(yīng)商。但如果又非要檢測(cè)這些物種的指標(biāo)時(shí)，要對(duì)待檢物(如有種屬差異性)進(jìn)行同源性分析以及試劑盒的種屬交叉反應(yīng)數(shù)據(jù)。對(duì)于樣品類型而言，一般的商業(yè)化試劑盒都經(jīng)過血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液的驗(yàn)證。在選擇試劑盒時(shí)，要詳細(xì)閱讀說明書，比如血漿樣本抗凝劑的使用是否與試劑盒兼容。另外，在某些情形下樣品中會(huì)存在干擾因素比如溶血血漿、高脂肪含量的樣品、人抗鼠抗體(HAMA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清中含胎牛血清等。因此需根據(jù)樣品來選擇試劑盒，必要時(shí)還要根據(jù)樣本來適當(dāng)優(yōu)化?；蛟跇悠肥占?，先閱讀一些可靠供應(yīng)商試劑盒的說明書或直接咨詢。如果您的樣品為組織或細(xì)胞裂解物，則需要更謹(jǐn)慎的選擇試劑盒。市面上大多數(shù)的商業(yè)化試劑盒沒有經(jīng)過多種來源組織樣本的驗(yàn)證。這需要實(shí)驗(yàn)君能理解不是所有試劑盒所用的抗體對(duì)，都能特異的從一堆裂解物蛋白中特異檢出您的目的蛋白，還要考慮組織樣品的基質(zhì)效應(yīng)(Matrix Effect)等。但如果實(shí)驗(yàn)君要了解組織樣品的制備問題，我們另起一文來總結(jié)。

3. 根據(jù)樣品中檢測(cè)物水平來選擇試劑盒

如果實(shí)驗(yàn)君對(duì)于樣品中待檢物的水平?jīng)]有任何可參考的數(shù)據(jù)，選擇寬動(dòng)力學(xué)檢測(cè)范圍的試劑盒。如果樣品中待檢物的含量很低，建議選擇高靈敏度的試劑盒。為了降低基質(zhì)效應(yīng)，有必要用稀釋液至少做2倍稀釋。如果樣品中待檢物含量遠(yuǎn)超過試劑盒的檢測(cè)范圍（標(biāo)曲范圍）， 也需做適當(dāng)?shù)谋稊?shù)稀釋。在zui后計(jì)算結(jié)果時(shí)，需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

4. 根據(jù)樣本可獲得性來選擇試劑盒

通常而言，商業(yè)化試劑盒的樣品用量都在50ul或100ul, 但也有一些供應(yīng)商的試劑盒對(duì)樣品的用量要求可少至10ul。如果您的樣品很珍貴或較難獲取，則需要認(rèn)真考慮試劑盒對(duì)樣品用量的要求。如果樣品量少，且要做多因子檢測(cè)時(shí)更需謹(jǐn)慎。

5. 細(xì)致比較試劑盒關(guān)鍵性技術(shù)參數(shù)

ELISA試劑盒的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)包括板內(nèi)差異性、板間差異性、批間差異性、重復(fù)性、特異性及交叉反應(yīng)性、回收率等。如果實(shí)驗(yàn)君經(jīng)常開展ELISA實(shí)驗(yàn)，建議使用同一廠家的試劑盒，這樣可盡量保證數(shù)據(jù)的重復(fù)性(當(dāng)然前提是實(shí)驗(yàn)條件的一致性)。對(duì)于科研用的定量ELISA試劑盒，不同的生產(chǎn)廠家使用的抗體對(duì)、酶以及底物、生產(chǎn)工藝和研發(fā)實(shí)力不盡相同，自然不同廠家試劑盒測(cè)出的數(shù)據(jù)會(huì)有差異。

6. 供應(yīng)商資質(zhì)評(píng)估

縱觀國(guó)內(nèi)外ELISA試劑盒供應(yīng)商，“勁馬”估計(jì)至少100余家。有些供應(yīng)商可提供數(shù)百種常用指標(biāo)ELISA，然而有些供應(yīng)商則聲稱可提供數(shù)千種甚至上萬(wàn)種指標(biāo)的試劑盒，但質(zhì)量參差不齊，更有濫竽充數(shù)禍害科研之輩。那如果選擇供應(yīng)商呢？ *. 從同行或?qū)嶒?yàn)室同僚了解供應(yīng)商的口碑，售前售后的處理情況。第二. 查詢供應(yīng)商的詳細(xì)了解相關(guān)指標(biāo)，可查詢這些指標(biāo)是否已經(jīng)開發(fā)出特異性抗體？如果查遍連抗體都還不可獲取，又如何開發(fā)出ELISA試劑盒呢？ 第三. 文獻(xiàn)引用是*，尤其是SCI期刊文章對(duì)供應(yīng)商產(chǎn)品的引用。第四. 了解供應(yīng)商的研發(fā)歷史和品牌史，很多供應(yīng)商頻頻更換公司名或更換公司注冊(cè)地，其中名堂實(shí)驗(yàn)君應(yīng)該能悟出。不要迷信國(guó)外“品牌”，國(guó)外“品牌”不代表是。很多打著國(guó)外旗號(hào)的公司，其實(shí)就是空殼的皮包公司，從OEM劣質(zhì)產(chǎn)品。國(guó)外供應(yīng)商也有售后不給力的時(shí)候。

7. 經(jīng)費(fèi)預(yù)算

說了半天，還是要看課題經(jīng)費(fèi)的預(yù)算。沒經(jīng)費(fèi)咋搞科研呢？*的一般質(zhì)量可靠，文獻(xiàn)引用多。但品牌由于進(jìn)口和運(yùn)輸?shù)瘸杀据^高，因此售價(jià)也較高。其實(shí)國(guó)產(chǎn)品牌也是不錯(cuò)的選擇， 因省去不少物流和報(bào)關(guān)費(fèi)用，與國(guó)外進(jìn)口試劑盒相比價(jià)格上有比較大的優(yōu)惠，而且能提供比較靈活的包裝規(guī)格, 如48tests小包裝，非常適合中國(guó)國(guó)情。國(guó)內(nèi)ELISA品牌靠譜的還是有4到5家，這里就不做硬廣告了。

8. 認(rèn)清訂購(gòu)渠道

不論是還是國(guó)內(nèi)品牌，都需要在訂購(gòu)前先與生產(chǎn)廠商詳細(xì)溝通產(chǎn)品細(xì)節(jié)（比如酶標(biāo)板是否可拆卸），了解售前售后技術(shù)服務(wù)能力等。然后咨詢其方訂購(gòu)渠道，比如直接向廠家訂購(gòu)或通過中國(guó)區(qū)或省級(jí)授權(quán)代理商經(jīng)銷商訂購(gòu)。謹(jǐn)防假冒產(chǎn)品，花了錢是小事，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性、真實(shí)性是大事呀，耽誤了時(shí)間延遲了畢業(yè)更是不無處訴苦！ 空留傷心淚。選擇正規(guī)渠道，選擇品質(zhì)！早發(fā)高質(zhì)量Paper!

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