技術(shù)解析：ELISA試劑盒的顯色弱問題

更新時間：2016-07-12 瀏覽次數(shù)：1561

上周，我公司技術(shù)員根據(jù)自身經(jīng)驗總結(jié)了一篇ELISA實驗心得及操作技巧，發(fā)布出后得到了業(yè)內(nèi)人士的高度關(guān)注。本周就ELISA試劑盒的顯色弱問題我司的ELISA咨詢顧問給出了具體分析

顯色一定要控制時間，根據(jù)試劑盒說明操作即可。一般來說，顯色時間過短，結(jié)果偏低；顯色時間過長，空白增高或者非特異性顯色增加。

ELISA顯色弱的可能原因	對應(yīng)的解決方法
超過有效期的產(chǎn)品可能會產(chǎn)生很弱的信號	檢查產(chǎn)品的有效期
加入試劑的體積和時間有誤	確定所使用的每一個試劑的體積正確的和加入的時間是適當(dāng)?shù)?/span>
試劑、樣品用前未能平衡	用前試劑、樣品置室溫平衡10分鐘左右
縮短孵育時間能使實驗的信號變?nèi)?/span>	檢查孵育的時間
在溫度變化的環(huán)境內(nèi)孵育酶標(biāo)板	確定孵育的溫度，應(yīng)避免溫度的變化
使用了被污染的試劑	檢查試劑是否被污染
標(biāo)準(zhǔn)品/標(biāo)本制備方法不規(guī)范	檢查標(biāo)準(zhǔn)品/標(biāo)本的制備，標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)按說明書進(jìn)行復(fù)溶和稀釋。低溫貯存的標(biāo)本避免反復(fù)凍融，嚴(yán)禁使用溶血標(biāo)本。樣品用NaN3防腐,抑制了酶的反應(yīng)
顯色底物制備不規(guī)范	檢查底物的制備，如體積是否正確，混合是否恰當(dāng)充分
檢測時間不當(dāng)	是否在規(guī)定的時間內(nèi)檢測
儀器設(shè)定不正確，濾光片不匹配	儀器是否設(shè)定正確，濾光片的使用等

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