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13817140470更新時(shí)間:2017-09-01 瀏覽次數(shù):1909
九月的天空很美很藍(lán),在藍(lán)的有些過分的天空下就迎來了開學(xué)日,今天對(duì)于我們來說是九月*個(gè)工作日,對(duì)于祖國的花朵們來說確是一個(gè)令人充滿期待及興奮的日子。今天上海勁馬分享開學(xué)*課:ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)前如何做好優(yōu)化?
ELISA檢測(cè)試劑盒包被條件的優(yōu)化:
1、包被液的挑選:通常常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,假如包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話,也可以運(yùn)用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。
2、包被濃度的挑選:包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)改變,通常蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml,要清晰對(duì)于特定包被抗原的zui適包被濃度需求通過試驗(yàn)來斷定。
3、包被溫度的挑選:通常是4-8度條件下放置一個(gè)黑夜或者37度保溫2小時(shí),咱們強(qiáng)烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的堅(jiān)持。
4、包被抗原的挑選:可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機(jī)化合物,因?yàn)榉肿恿刻?,通常難于直接吸附在酶標(biāo)板上,通常都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì),比如BSA等偶聯(lián),偶聯(lián)物吸附于固相載體上。
ELISA檢測(cè)試劑盒加樣的優(yōu)化:
在這一進(jìn)程中,通常狀況下有三次加樣,它們分別是加標(biāo)本,加酶物,加底物。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)部分濃縮,散布不均,應(yīng)充沛混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下倒置混和,不要在混勻器上強(qiáng)烈振動(dòng)。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只要待血清天然凝固、縮短后即可獲得。也可在板孔中參加稀釋液,再在其參加血清標(biāo)本,然后在微型震動(dòng)器上震動(dòng)1分鐘以保證混和。通常說來,在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超越一星期測(cè)定的需低溫冰存。
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