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13817140470更新時(shí)間:2019-06-25 瀏覽次數(shù):7273
雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,但要注意的是在一步法(待測抗原與酶標(biāo)抗體一起加入反應(yīng))測定中,當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時(shí),過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合,而不再形成“夾心復(fù)合物”出現(xiàn)鉤狀效應(yīng),甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法試劑測定標(biāo)本中含量可異常增高的物質(zhì)(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時(shí),應(yīng)注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點(diǎn)是類風(fēng)濕因子(RF)的干擾。RF是一種自身抗體,多為IgM型,能和多種動(dòng)物IgG的Fc段結(jié)合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標(biāo)本中如含有RF,它可充當(dāng)抗原成份,同時(shí)與固相抗體和酶標(biāo)抗體結(jié)合,表現(xiàn)出假陽性反應(yīng)。
雙抗體夾心法適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原,但不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原,因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。
雙抗體夾心法的簡要操作步驟為:
1)先加入抗體,使抗體固定結(jié)合于載體表面;
2)再加樣品,使目標(biāo)檢測抗原形成抗原-抗體復(fù)合物;
3)加酶標(biāo)抗抗體(第二種動(dòng)物抗抗原的酶標(biāo)抗體);
4)加入酶促反應(yīng)底物,發(fā)生顯色反應(yīng),顯色的深淺與待測抗原的量成正比。
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