前面給大家介紹的ELISA實(shí)驗(yàn)幾大常見(jiàn)方法，不知道您掌握多少了呢？如果沒(méi)有掌握那也沒(méi)有關(guān)系，可以去瀏覽之前發(fā)布的文章哦！我司提供技術(shù)在線指導(dǎo)，如您有技術(shù)問(wèn)題，也可前來(lái)咨詢我司技術(shù)人員！今天是常見(jiàn)方法的zui后一篇了，主要解析的是捕獲包被法檢測(cè)抗體和捕獲包被法檢測(cè)抗體，具體內(nèi)容請(qǐng)往下看！

    捕獲包被法檢測(cè)抗體

    捕獲包被法（亦稱反向間接法）ELISA，主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測(cè)定。以目前常用的IgM測(cè)定為例，因血清中針對(duì)某種抗原的特異性IgM和IgG同時(shí)存在，則后者可干擾IgM的測(cè)定。因此先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再測(cè)定特異性IgM。IgM抗體的檢測(cè)用于傳染病的早期診斷中。先用抗人IgM抗體包被固相，以捕獲血清標(biāo)本中的IgM（其中包括針對(duì)抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM）。然后加入抗原，此抗原僅與特異性IgM相結(jié)合。繼而加酶標(biāo)記針對(duì)抗原的特異性抗體。再與底物作用，呈色即與標(biāo)本中的IgM成正相關(guān)。此法常用于病毒性感染的早期診斷。類風(fēng)濕因子（RF）同樣能干擾捕獲包被法測(cè)定IgM抗體，導(dǎo)致假陽(yáng)性反應(yīng)。因此中和IgG的間接法近來(lái)頗受青睞，用這類試劑檢測(cè)抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功。

    捕獲法測(cè)抗體的簡(jiǎn)要操作步驟：
    1）特異性捕獲抗體的包被，先把能特異性結(jié)合待測(cè)抗原的抗體固定于固相載體表面；
    2）加入待測(cè)樣品，通過(guò)固定在載體表面的針對(duì)該抗原的抗體固定于載體表面；
    3）加入特異性抗原以及針對(duì)該特異性抗原的酶標(biāo)抗體；
    4）加入酶促反應(yīng)底物，發(fā)生顯色反應(yīng)，顯色的深淺與待測(cè)抗體的量成正比。

    捕獲包被法檢測(cè)抗體

    近年在親和素-生物素系統(tǒng)上又發(fā)展出ABS-ELISA法 。親和素是一種糖蛋白，每個(gè)分子由4個(gè)能和生物素結(jié)合的亞基組成，生物素為小分子化合物。用化學(xué)方法制成的衍生物素-羥基琥珀酰亞胺酯可與抗體或酶形成生物素標(biāo)記產(chǎn)物，標(biāo)記方法頗為簡(jiǎn)便，并且不影響抗體或酶原有的生物學(xué)活性。親和素生物素系統(tǒng)，簡(jiǎn)稱ABS（avidin-biotin system）。由于親和素與生物素間的親和力*，結(jié)合迅速，且極其穩(wěn)定，使BAS標(biāo)記技術(shù)比常規(guī)酶聯(lián)免疫、放射免疫及熒光免疫技術(shù)有著更高的靈敏度，為微量抗原、抗體的檢測(cè)開辟了新的途徑，大大提高了檢測(cè)的靈敏度，但該方法比普通ELISA多用了兩種試劑，增加了操作步驟，因此在臨床檢驗(yàn)中ABS-ELISA應(yīng)用不多。ABS-ELISA法可分為酶標(biāo)記親和素-生物素（LAB）法和橋聯(lián)親和素-生物素（ABC）法兩種類型。兩者均以生物素標(biāo)記的抗體（或抗原）代替原ELISA系統(tǒng)中的酶標(biāo)抗體（抗原）。

    在LAB法中，將特異性抗體生物素化、酶分子標(biāo)記在親和素分子上，生物素化抗體與被檢抗原結(jié)合后，再借BAS的高度親和力將酶分子聯(lián)結(jié)到抗原分子上，經(jīng)酶促反應(yīng)即可檢出抗原，因此提高檢測(cè)的敏感度。

    ABC法同樣將特異性抗體生物素化、酶分子標(biāo)在生物素上，親和素和酶標(biāo)生物素需要先按一定比例形成ABC復(fù)合物，這種網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)結(jié)合了大量的酶分子，當(dāng)親和素尚未被酶標(biāo)生物素飽和時(shí)，生物素化抗體即可與之結(jié)合, 使被檢抗原、生物素化抗體和酶標(biāo)生物素聯(lián)成一體。

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