1. 首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。

2. 用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量叢瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)趨置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4. 靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài);建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。

5. 貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%，可正常傳代;若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預留5m左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。

6. 懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離 心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5m培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密，度達80%左右時再進行傳代操作。

溫馨提醒:
可將培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中備用;細胞*傳代時，可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客自備的培養(yǎng)基混合使用，讓細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。確認細胞狀態(tài)良好后，應及時將部分細胞凍存，再進行后續(xù)的實驗，避免后期實驗失誤可能發(fā)生細胞污染或死亡而導致的細胞丟失，影響后續(xù)實驗。

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