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小鼠神經(jīng)干細(xì)胞細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
更新時(shí)間：2011-11-23 瀏覽次數(shù)：2376
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長(zhǎng)期以來(lái)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病一直是困擾人類健康的一大難題。1992年，Reynodls
【 1】等從成年小鼠腦紋狀體中分離出能在體外不斷分裂增殖，且具有多種分化潛能的細(xì)胞群，并正式提出了神經(jīng)干細(xì)胞（Neural stem cells, NSCs）的概念，從而打破了認(rèn)為神經(jīng)細(xì)胞不能再生的傳統(tǒng)理論。NSCs的發(fā)現(xiàn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷疾病的治療及其傷后功能重建帶來(lái)了曙光。1997年 Mckay將 NSCs的概念總結(jié)為：具有分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞及少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力，能自我更新并可以提供大量腦組織細(xì)胞【 2】。隨著 NSCs在醫(yī)學(xué)和研究領(lǐng)域的應(yīng)用逐漸增多，利用穩(wěn)定的 NSCs細(xì)胞株，可以為關(guān)于 NSCs的深入研究包括細(xì)胞的活動(dòng)、正常與非正常狀態(tài)等，以及體外構(gòu)建神經(jīng)組織代謝性疾病和腦組織損傷的藥物篩選模型，提供可靠的細(xì)胞資源，同時(shí)為研究工作節(jié)約寶貴的時(shí)間和培養(yǎng)費(fèi)用。
本公司培養(yǎng)出品的取自 SPF級(jí)的孕齡 14天的 ICR小鼠（*軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK-（軍）2007-004）胚胎大腦的 SVZ區(qū)，用 DFR03神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基（貨號(hào)： M1024）進(jìn)行原代培養(yǎng)。傳代擴(kuò)增至第二代凍存（DIV15），每支含 1×106個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞經(jīng)檢測(cè)，鏡下成球形生長(zhǎng)（如圖 1所示）；單克隆實(shí)驗(yàn)及 Brdu染色證明其具備良好的增殖能力（如圖 2,圖 3所示）；免疫熒光化學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，該細(xì)胞能表達(dá) NSCs的標(biāo)志性蛋白 nestin（如圖 4所示）；5%胎牛血清誘導(dǎo)可分化稱為神經(jīng)元（neuron）、星形膠質(zhì)細(xì)胞（astrocyte）（如圖 5所示）。品名：ICR小鼠神經(jīng)干細(xì)胞貨號(hào)：C3016規(guī)格：1×106cells/管產(chǎn)品特性：
1. SPF級(jí)的孕齡 14天的 ICR小鼠胚胎大腦的 SVZ區(qū)
2. 在特定的已知成分的無(wú)血清培養(yǎng)基可自我更新，倍增時(shí)間小于 48小時(shí)。
3. 在體外具有多分化潛能
4.穩(wěn)定的正常二倍體細(xì)胞。質(zhì)量控制：本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)了細(xì)菌、真菌、霉菌、支原體檢測(cè)。運(yùn)輸與保存：
本品使用 10%DMSO凍存液冷凍，采用干冰保存運(yùn)輸，收到細(xì)胞后，如果不立即復(fù)蘇，請(qǐng)將細(xì)胞放入液氮中保存待用。切勿置于室溫下，以免造成 DMSO損傷。細(xì)胞復(fù)蘇方法：
取出凍存管后，投入 37℃水浴中，震蕩解凍，酒精消毒管壁外側(cè)后，將其轉(zhuǎn)入超凈臺(tái)中，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，加入 5mlDFR03神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基， 1000轉(zhuǎn)，離心 5分鐘，棄去上清，在加入 5mlDFR03神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。產(chǎn)品承諾：
實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果表明，本株 ICR小鼠 SVZ來(lái)源的 NSCs體外增殖 10代后，仍能夠保持神經(jīng)干細(xì)胞良好的特性。建議使用本公司配套的培養(yǎng)基和正確的培養(yǎng)方法來(lái)解凍、傳代，以此保證細(xì)胞具備良好的增殖和分化能力。使用：
本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用，不可應(yīng)用于臨床。附圖（供參考）
圖 1.體外培養(yǎng) 15天（ DIV15），第二代 NSCs在培養(yǎng)基中懸浮成球生長(zhǎng)圖 2在 1%膠原水凝膠中 NSCs由單個(gè)細(xì)胞形成克隆球
圖 3.BrdU熒光染色
圖 4.原代 NSCs的 nestin染色陽(yáng)性
圖 5.由 NSCs誘導(dǎo)分化得到的神經(jīng)元（β -tubulin III陽(yáng)性 ,綠色）和星形膠質(zhì)細(xì)胞（ GFAP陽(yáng)性，紅色）
參考文獻(xiàn)
【1】 Reynolds BA, Weiss S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system. Science,1992, 255（5052）:1707-1710.
【2】 McKay R. Stem cells in the central nervous system. Science, 1997,276（5309）:66