一、血清的制備方法問題。

1、問：我的實(shí)驗(yàn)需要自己制備一些血清用于培養(yǎng)細(xì)胞，有沒有人知道用于培養(yǎng)細(xì)胞的血清需要怎樣的制備過程？

答：自己制備血清當(dāng)心污染啊。如果無菌條件好的話，用靜置析出方法就行。

2、問：一般我們用得胎牛血清用前還要滅活，我想用大鼠的血，不知道要不要滅活？

答：你直接把采來的血液在離心管里4℃過夜，離心，取上清，在無菌過濾，也可滅活，然后分裝凍存，用時(shí)再配。

3、問：如果滅活會(huì)不會(huì)對(duì)血清中的一些因子有損傷？

答：加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在進(jìn)行免疫學(xué)研究、培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。滅活一般不會(huì)對(duì)血清中的一些因子損傷的。

二、心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)血清的使用問題。

1、問：在進(jìn)行心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)，需要用含血清的培養(yǎng)基中止胰酶的消化作用，我現(xiàn)在使用的是含血清10%的培養(yǎng)液，但近日看北醫(yī)一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)的課件發(fā)現(xiàn)，有用1%血清培養(yǎng)液進(jìn)行中止消化的，想問一下，1%的是否可以，效果是否有保證？這樣確實(shí)能節(jié)省不少血清的。

答：關(guān)于心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)的FBS問題：

(1)1%的血清*培養(yǎng)基可不可以，得看你胰酶的用量。但是在心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)就不行。 10%的FBS*培養(yǎng)基效果都不太好，開始心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)需要高濃度的FBS，20%左右，但這就有出現(xiàn)另一個(gè)問題，在FBS*培養(yǎng)基中，成纖維細(xì)胞呈優(yōu)勢(shì)細(xì)胞，須得在培養(yǎng)基加入適量的BrdU以抑制其生長(zhǎng)，純化心肌細(xì)胞。

(2)FBS的作用不僅僅是拿來中和胰酶，只是FBS中的一些蛋白質(zhì)如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用。

(3)元代心肌細(xì)胞培養(yǎng)的FBS使用，有講究：剛開始使用20%左右的高濃度的FBS，后逐漸遞減為無血清的DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng)。

2、問：我胰酶的用量是0.08% ，并混和了0.08%的膠原酶。FBS要高濃度遞減是否是說的在細(xì)胞培養(yǎng)中啊，難道在消化時(shí)終止也需要如此高的濃度嗎，還有，我的BRDU只用到48小時(shí)就不用了，因?yàn)閾?dān)心其損傷太大，可以持續(xù)用多久呢？

答：我用10%FBS終止的，然后差速1h，然后還是用10%FBS的HG-dmem養(yǎng)的，沒有用brdu，心肌細(xì)胞還是比較多和穩(wěn)定的，我第3天就可以用，第2天晚上看就會(huì)有搏動(dòng)。