ELISA的樣本收集與前期準(zhǔn)備

        利用ELISA進行臨床檢驗常見的樣本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些樣本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。
（一） 臨床樣本的收集
A、血液樣本
    有些生理因素，如吸煙、進食、運動、情緒波動、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無法避免，應(yīng)在標(biāo)本上注明該因素。
1．外周血
    一般選取左手無名指內(nèi)側(cè)采血，該部位應(yīng)無凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他手指部位代替。對燒傷病人，可選擇皮膚完整處采血。由于部分血液常規(guī)檢測（如白細(xì)胞計數(shù)、分類等）受生理因素影響波動過大，比較時宜使條件盡量一致。涉及到體內(nèi)出、凝血功能的檢測項目（如血小板計數(shù)，出血時間或凝血時間等）的檢測，一定要注意了解患者是否用過抗凝、促凝藥物，以便在減少或避免干擾因素的影響。
2．靜脈血
    除涉及各種止血和血栓檢測等項目需采用抗凝靜脈血血漿外，目前絕大多數(shù)檢測項目的分析檢測可直接采用靜脈血的血清。在血清檢測項目中，有些（如血糖，血脂等）受飲食及晝夜因素影響較大，一般以清晨空腹血標(biāo)本為宜；有些在血中衰變較快（血清酶活性測定如ACP活性等），0~4℃貯存活性減弱也不一，這些項目的檢測必須及時而快速；有些（如肌酸激酶等）受運動等因素影響較大。抽血時避免溶血的發(fā)生也十分重要，尤其涉及血鉀，LDH等的測定。

B、尿液樣本
    同血標(biāo)本一樣，尿液標(biāo)本受飲食、運動、藥物量等因素的影響也較大，特別是飲食的影響，故一般來說晨尿優(yōu)于隨機尿。晨尿是指清晨起床后的*次尿標(biāo)本，較濃縮和酸化，有形成分（如血細(xì)胞，上皮細(xì)胞，管形）相對集中便于觀察。隨機尿即隨意一次尿，留取方便，但受飲食、運動、藥物影響較甚，易于出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果，如飲食性蛋白尿，飲食性糖尿，維生素C干擾潛血結(jié)果等。餐后尿（午餐后2小時收集的患者尿液）適用于尿糖，尿蛋白和尿膽原的檢查，此時的尿標(biāo)本可增加試驗敏感性，檢出較輕微的病變。12小時尿細(xì)胞計數(shù)即Addis計數(shù)（前晚8時排空膀胱后留取至次日晨8時的所有尿液），因時間較長，細(xì)菌易繁殖，須加入防腐劑甲醛。24小時尿（*天晨8時排空膀胱后留取至次日晨8時的所有尿液）中化學(xué)物質(zhì)的定量，包括蛋白，糖，尿17-酮、17-羥類固醇，兒茶酚胺，Ca2+等，檢測不同的物質(zhì)，選擇不同的防腐劑防腐。清潔中段尿多用于尿細(xì)菌培養(yǎng)，要求無菌，沖洗外陰后留取標(biāo)本。所有尿標(biāo)本的收集都應(yīng)足量，zui少12 ml，50 ml，定時尿須全部收集，對女性患者應(yīng)避免陰道分泌物、經(jīng)血污染尿標(biāo)本。

C、糞便樣本
    糞便標(biāo)本的檢測對判斷消化系統(tǒng)疾病有重要參考價值。采集時要求用干凈的竹簽選取含有粘液、膿血等異常病變成分的糞便，對外觀無異常的糞便須從表面、深處及糞端多處取材。找寄生蟲蟲體及作蟲卵計數(shù)應(yīng)收集24小時糞便。查痢疾阿米巴滋養(yǎng)體應(yīng)于排便后立即檢查，從有膿血和稀軟處取材，保溫送檢。查日本血吸蟲蟲卵時應(yīng)取粘液、膿血部分，孵化毛蚴時至少留取30g糞便，且需盡快處理。檢查蟯蟲卵須用透明薄膜拭子于晚12時或清晨排便前自肛門周圍皺襞處拭取并立即鏡檢。隱血試驗（化學(xué)法），試驗前3日禁食肉類及含動物血食物并禁服鐵劑，維生素C等。所有糞便標(biāo)本采集后1小時內(nèi)應(yīng)檢查完畢，以防止有形成分受消化酶及pH的破壞,來不及檢測的，應(yīng)及時用PBS進行緩沖處理，離心去上清保存。

D、腦脊液樣本
    腦脊液標(biāo)本采集后立即送檢，放置過久將影響檢驗結(jié)果：如細(xì)胞變性，破壞，導(dǎo)致計數(shù)和分類不準(zhǔn)；有些化學(xué)物質(zhì)如葡萄糖等將分解含量減少；細(xì)菌發(fā)生自溶影響細(xì)菌的檢出率。腦脊液抽取后一般分裝三個無菌管，*管作細(xì)菌培養(yǎng)，第二管作化學(xué)分析和免疫學(xué)檢查，第三管作一般性狀及顯微鏡檢查，三管的順序不宜顛倒。因標(biāo)本采集較難，全部送檢和檢測過程應(yīng)注意安全。

E、胸腹水樣本
    與腦脊液標(biāo)本一樣，采集后的標(biāo)本注意安全，及時送檢。一般也分裝三管，一管作常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查，一管生化檢查，一管細(xì)菌培養(yǎng)，順序以與腦脊液相同為宜。

F、前列腺液樣本
    前列腺液標(biāo)本由前列腺按摩后采集，液量少時直接滴在載玻片上及時送檢，須注意防止標(biāo)本蒸干，量多時收集在潔凈干燥的試管中。若按摩不出前列腺液，可檢查按摩后的尿液沉渣。

G、精液樣本
    精液標(biāo)本采集前應(yīng)禁欲3~7天，排凈尿液后可用手淫法或其他方法將精液直接排入干凈的容器中，保溫并及時送檢。由于精子日間變動較大，一般應(yīng)檢查2~3次（每次間隔1~2周）方可做診斷。

H、陰道分泌物樣本
    陰道標(biāo)本采集前24小時應(yīng)禁止房事、盆浴、陰道檢查、陰道灌洗及局部上藥等，取材所用器械需清潔。一般用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材，制成生理鹽水涂片后觀察陰道分泌物標(biāo)本，經(jīng)期的女性患者不宜檢查陰道分泌物標(biāo)本。
 
 
 
（二） ELISA的樣本實驗準(zhǔn)備
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天就進行
檢測的樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的，-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    液體類標(biāo)本:  包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
3. 尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
5. 培養(yǎng)細(xì)胞
    檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
6. 組織標(biāo)本
    切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。