一、 生物學(xué)檢測法

　　TNF的主要 生物 學(xué)活性之一就是對某些腫瘤細胞的細胞毒作用。根據(jù)這一特點，可利用TNF敏感的靶細胞測定TNF活性，根據(jù)細胞死亡得出TNF的相對活性。該法的關(guān)鍵是選擇敏感特異的靶細胞。靶細胞可以是長期傳代培養(yǎng)的細胞系，也可以是新鮮分離的原代細胞（如瘤細胞）?，F(xiàn)以貼壁生長的L929細胞為例，簡述TNF活性的檢測原則。

　　兩種TNF均可傷體外培養(yǎng)的L929細胞，細胞死亡率與TNF活性成正比。某些染料如中性紅、結(jié)晶紫等能使活細胞染上相應(yīng)顏色，再用脫色液將染料脫出，通過測定其吸光度值間接監(jiān)沒細胞存活狀態(tài)。

　　試驗原則是收集對數(shù)生長期的L929細胞，用培養(yǎng)液調(diào)細胞至適當(dāng)濃度，加入培養(yǎng)板小孔中，置37℃，5％CO2 溫箱中培養(yǎng)16～24h，換液后，在各孔中加入不同稀釋度的待檢樣品，再加適當(dāng)濃度的放線菌素D和適量培養(yǎng)液，繼續(xù)溫育16～24h，棄培養(yǎng)液，經(jīng)Hanks液洗滌后，每孔加入適當(dāng)濃度的結(jié)晶紫染色液，37℃培養(yǎng)1h，使活細胞充分著色。

然后各孔加1％SDS短時溫育使染色細胞溶解，再以酶標(biāo)測定儀測各孔A 570nm 值。每次檢測均設(shè)培養(yǎng)液（陰性）對照和不同濃度的rTNF（陰性）對照。以使陰性對照50％細胞溶解的標(biāo)本最大稀釋倍數(shù)為TNF活性單位，以u/ml表示。

　　由于放線菌素D能抑制DNA的合成、降低靶細胞對損傷的修復(fù)機制，因而在檢測中加入放線素D可使靶細胞對TNF的敏感性增高10～200倍。

　　二、免疫學(xué)檢測法

　　通常采用ELISA，該法特異性高、敏感性強且快速使捷，而且能夠區(qū)別TNFα和TNFβ，為臨床檢測病人 血清 中TNF水平的有效方法，但不能反映TNF活性。

　　三、其它檢測法

　　檢測TNF還可用生物發(fā)光法及NAG微量酶反應(yīng)比色法。這類方法是應(yīng)用生化技術(shù)檢測細胞內(nèi)代謝的變化，從而推知靶細胞功能變化及死亡情況。其優(yōu)點是不僅反映細胞的死亡情況，而且能反映細胞的功能變化。此外，還具有快速、方便、微量的特點。