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細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程

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養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程:潛伏期→指數(shù)增生期→停滯期 一、潛伏期(latent phase): 細(xì)胞接種后,先經(jīng)過(guò)一個(gè)在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)的懸浮期.此時(shí),細(xì)胞質(zhì)回縮, 胞體呈圓球形.然后細(xì)胞貼附于載體表面,稱貼壁,懸浮期結(jié)束. 細(xì)胞貼壁速度與細(xì)胞種類, 培養(yǎng)基成分,載體的理化性質(zhì)等密切相關(guān)。一般情況下,原代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁速度慢,可達(dá)10-24 小時(shí)或更多, 而傳代細(xì)胞系貼壁速度快, 通常10-30 分鐘即可貼壁。細(xì)胞貼壁后還需經(jīng)過(guò)一個(gè)潛伏階段,才進(jìn)入生長(zhǎng)和增殖期.原代培養(yǎng)細(xì)胞潛伏期,約24-96 小時(shí)或更長(zhǎng), 連續(xù)細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞潛伏期短,僅需6-24 小時(shí)。 二、指數(shù)增生期(logarithmic growth phase) 這是細(xì)胞增殖zui旺盛的階段,分裂相細(xì)胞增多。指數(shù)增生期細(xì)胞分裂相數(shù)量可作為判定細(xì)胞生長(zhǎng)是否旺盛的一個(gè)重要標(biāo)志。通常以細(xì)胞分裂相指數(shù)(Mitotic index, MI)表示,即細(xì)胞群中每1000 個(gè)細(xì)胞中的分裂相數(shù)。一般細(xì)胞的分裂指數(shù)介于0.1%-0.5%,原 代細(xì)胞分裂指數(shù)較低,而連續(xù)細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分裂相指數(shù)可高達(dá)3%-5%。 指數(shù)增生期的細(xì)胞是細(xì)胞活力時(shí)期,是進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)*時(shí)期,也是凍存細(xì)胞的時(shí)機(jī)。在接種細(xì)胞數(shù)量適宜情況下,指數(shù)增生期持續(xù)3-5 天后,隨著細(xì)胞數(shù)量不斷增多、生長(zhǎng)空間減少,zui后細(xì)胞相互接觸匯合成片。正常細(xì)胞相互接觸后能抑制細(xì)胞運(yùn)動(dòng),這種現(xiàn)象稱接觸抑制現(xiàn)象(contact inhibition)。而惡性腫瘤細(xì)胞無(wú)接觸抑制現(xiàn)象,能繼續(xù)移動(dòng)和增殖,導(dǎo)致細(xì)胞向三維空間擴(kuò)展,使細(xì)胞發(fā)生堆積(piled up)。細(xì)胞接觸匯合成片后,雖然發(fā)生接觸抑制,但只要營(yíng)養(yǎng)充分,細(xì)胞仍能進(jìn)行增殖分裂,因此細(xì)胞數(shù)仍然在增多。但是,當(dāng)細(xì)胞密度進(jìn)一步增大,培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)成分減少,代謝產(chǎn)物增多時(shí),細(xì)胞因營(yíng)養(yǎng)枯竭和代謝產(chǎn)物的影響,導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止,這種現(xiàn)象稱密度抑制現(xiàn)象(Density Inhibition)。 三、停滯期(Stagnate phase) 細(xì)胞數(shù)量達(dá)到飽和密度后,如不及時(shí)進(jìn)行傳代,細(xì)胞就會(huì)停止增殖,進(jìn)入停止期。此時(shí)細(xì)胞數(shù)持平,故也稱平臺(tái)期(Plateau phase)。停滯期細(xì)胞雖不增殖,但仍有代謝活動(dòng)。如不進(jìn)行分離傳代,細(xì)胞會(huì)因培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)耗盡、代謝產(chǎn)物積聚、pH 下降等因素中毒,出現(xiàn)形態(tài)改變,貼壁細(xì)胞會(huì)脫落,嚴(yán)重的會(huì)發(fā)生死亡,因此,應(yīng)及時(shí)傳代。

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