細胞膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品簡介：

細胞膜蛋白提供了一種比較簡單、方便地 從培養(yǎng)細胞或組織中抽提細胞膜蛋白和細胞漿蛋白的方法。抽提的膜蛋白不僅包括質(zhì)膜上的膜蛋白，也包括線粒體膜、 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜和高爾基體膜等上的膜蛋白。

  本試劑盒通過勻漿適度破碎細胞，經(jīng)低速離心去除細胞核和少數(shù)未破碎的細胞產(chǎn)生的沉淀，隨后取上清高速離心獲得細 胞膜沉淀和含有細胞漿蛋白的上清，然后通過優(yōu)化的膜蛋白抽提試劑從沉淀中抽提獲取膜蛋白。

      約90分鐘即可完成培養(yǎng)細胞或組織的細胞膜蛋白與細胞漿蛋白的分離和抽提。抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，

Western、酶活性測定等后續(xù)實驗。

   膜蛋白抽提試劑中含有蛋白酶抑制劑、磷酸酯酶抑制劑和EDTA等，后續(xù)不適合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受這些抑制劑影 響的酶的活性測定，但抽提獲得的膜蛋白或細胞漿蛋白適合用于檢測蛋白的磷酸化水平。

     本試劑盒按照本說明書的操作步驟可以抽提100個細胞或組織樣品。

保存條件：

-20℃保存，一年有效。

注意事項：

     需自備PMSF 。PMSF 一定要在抽提試劑加入到樣品中前2-3 分鐘內(nèi)加入，以免PMSF 在水溶液中很快失效。

    使用本試劑盒抽提到的細胞 膜 蛋 白可 直 接 用BCA 法 蛋白濃度測定試劑盒 

抽提獲得的細胞膜蛋白不適合用Bradford法測定蛋白濃度。

  為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：

1.     準備試劑：室溫融解并混勻膜蛋白抽提試劑A和B，融解后立即置于冰浴上。取適量的膜蛋白抽提試劑A和B備用，在 使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。

2.     準備細胞或組織樣品：

a. 對于細胞

(1) 收集細胞

對于貼壁細胞：培養(yǎng)約2000-5000萬細胞，用PBS洗一遍，用細胞刮子刮下細胞或用含有EDTA但不含胰酶的細胞消化 液處理細胞使細胞不再貼壁很緊，并用移液器吹打下細胞。離心收集細胞，吸除上清，留下細胞沉淀備用。盡量避

免用胰酶消化細胞，以免胰酶降解需抽提的目的膜蛋白。

對于懸浮細胞：培養(yǎng)約2000-5000萬細胞，直接離心收集細胞，吸除上清，留下細胞沉淀備用。

(2) 洗滌細胞：用適量冰浴預冷的PBS輕輕重懸細胞沉淀，取少量細胞用于計數(shù)，剩余細胞4℃，600g離心5分鐘沉淀 細胞。棄上清，隨后4℃，600g離心1分鐘，以沉淀離心管管壁上的殘留液體并進一步沉淀細胞，盡zui大努力吸盡殘 留液體。

(3) 細胞預處理：把1毫升臨用前添加了PMSF的膜蛋白抽提試劑A加入至2000-5000萬細胞中，輕輕并充分懸浮細胞， 冰浴放置10-15分鐘。

b. 對于組織： 請來電向我公司銷售人員咨詢。

       上海勁馬實驗設備有限公司銷售經(jīng)營如下產(chǎn)品：

        一抗,二抗,Western免疫沉淀,免疫染色一氧化氮相關,活性氧相關抑制劑激活劑等，熒光探針,ELISA試劑盒，常用試劑。

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