實(shí)驗(yàn)原理

　　血細(xì)胞中的過(guò)氧化物酶(Peroxidase,POX或MPO)能分解試劑中的底物H2O2，釋出新生態(tài)氧，使無(wú)色聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色聯(lián)苯胺，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合形成藍(lán)黑色的顆粒，沉著于細(xì)胞質(zhì)中。

實(shí)驗(yàn)方法

　　材料：

　　1.1%TMB

　　2.亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液

　　3.1%過(guò)氧化氫溶液

　　4.稀過(guò)氧化氫溶液

　　5.瑞氏染色液

　　6.新鮮涂片(骨髓或者血片)、染色架、顯微鏡等

　　方法：

　　1.取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液10?l，溶液呈淡棕黃色。

　　2.在新鮮干燥的血片上，加混合溶液0.5ml，放置lmin后，再加稀過(guò)氧化氫溶液0.7ml，染色6min。

　　3.自來(lái)水沖洗，待干，瑞氏染液復(fù)染15～20min。

　　4.自來(lái)水沖洗，待干，油鏡鏡檢。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

　　細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有藍(lán)黑色顆粒者為陽(yáng)性。

　?。ǎo(wú)顆粒沉著；

　　（±）顆粒細(xì)小，分布稀疏；

　?。?）顆粒較粗，局灶分布；

　?。?+）顆粒粗大，分布較密，占胞質(zhì)1/2~2/3；

　?。?++）顆粒粗大，呈團(tuán)塊分布，幾乎布滿胞質(zhì)；

　?。?+++）全部胞質(zhì)均布滿顆粒，可覆蓋胞核。

注意事項(xiàng)

　　1.血涂片和骨髓片應(yīng)該新鮮制作，涂片應(yīng)該厚薄適宜；

　　2.TMB配置在85%~88%的乙醇溶液中效果較好，勿用90%~95%乙醇，否則細(xì)胞表面蛋白質(zhì)很快凝固，妨礙試劑向胞內(nèi)滲入而導(dǎo)致染色效果差；

　　3.H2O2需新鮮配置，其濃度與加入量不能隨意更改。涂片中粒細(xì)胞看不見(jiàn)顆粒，紅細(xì)胞呈棕色或者綠色，即表示H2O2過(guò)濃。若H2O2加于玻片上無(wú)氣泡，則表示無(wú)效；

　　4.染色液pH為5.5；

　　5.試劑應(yīng)置于低溫暗處，防止應(yīng)光線照射而失效。

過(guò)氧化物酶測(cè)定試劑盒產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下：

1、快速簡(jiǎn)便：全程約2分鐘，可測(cè)5例左右樣本。

2、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放3個(gè)月有效。

3、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.4%。

4、回收試驗(yàn)： X =98%。

5、受外界影響因素?。焊蓴_因素少，重復(fù)性強(qiáng)。