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技術(shù)團(tuán)隊(duì)為您解答標(biāo)準(zhǔn)曲線問(wèn)題?

更新時(shí)間:2015-12-03 瀏覽次數(shù):1369

zui近,站上關(guān)于ELISA試劑盒的討論帖子非常多,今天也發(fā)表一下自己的一些看法,對(duì)ELISA的見解有不對(duì)的地方,希望指正或者直接拍磚。
首先,談一下市場(chǎng)。首先RnD和Bender等一些的ELISA試劑盒還是很值得信賴的,也得到了市場(chǎng)的認(rèn)可,特別是RnD的盒子,我們賣的很好,就是價(jià)格好貴,經(jīng)費(fèi)不是很充裕的實(shí)驗(yàn)室難消費(fèi)的起。國(guó)內(nèi)的廠家,質(zhì)量在靈敏度上和RnD的盒子還是有很大差距,但是有一點(diǎn)是可以肯定的,盒子反映的結(jié)果是公正客觀的。還有一個(gè)缺點(diǎn)就是廠家可供選擇的盒子種類比較少,主要集中在標(biāo)準(zhǔn)曲線問(wèn)題上。許多試劑檢測(cè)都涉及到標(biāo)準(zhǔn)曲線的問(wèn)題,標(biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會(huì)直接影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,甚至是關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗,那么究竟如何繪制或制作標(biāo)準(zhǔn)曲線呢?
一、做標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品檢測(cè)時(shí)有幾個(gè)問(wèn)題需要注意
1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來(lái)的,所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事,否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)從談起。
2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣品的濃度,即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限。而對(duì)于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線,盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度zui陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
3、采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度,這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的偏離。
4、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí),應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行,以減少高濃度對(duì)低濃度的影響,提高準(zhǔn)確性。
5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn),但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。
6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動(dòng),但一般來(lái)說(shuō),相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98,對(duì)于有些實(shí)驗(yàn),至少要0.99甚至是0.999.

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