據(jù)Elisa試劑盒技術(shù)報(bào)道：

γ-干擾素(IFN-γ)是機(jī)體內(nèi)具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功能的重要細(xì)胞因子。研究表明,內(nèi)源性IFN-γ水平的高低在很大程度上可以反映機(jī)體的細(xì) 胞免疫狀態(tài),因此對(duì)樣本中的IFN-γ進(jìn)行定量分析,在免疫機(jī)制研究、免疫功能分析、疫苗免疫效果評(píng)估、器官移植、過(guò)敏反應(yīng)以及多種胞內(nèi)病原感染的診斷等 方面都具有極其重要的理論價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值。

近日，內(nèi)蒙古大學(xué)對(duì)干擾素檢測(cè)法有了新的突破。本實(shí)驗(yàn)旨在制備雞γ-干擾素(ChIFN-γ)單克隆抗體并建立對(duì)雞γ-干擾素的定量ELISA檢測(cè)方法。 本研究利用在大腸埃希氏菌中原核表達(dá)的雞γ-干擾素(rChIFN-γ)免疫8周齡BALB/c鼠3次后,按標(biāo)準(zhǔn)程序融合后,以昆蟲細(xì)胞表達(dá)的 rChIFN-γ作為檢測(cè)抗原,通過(guò)間接ELISA和有限稀釋法篩選了陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株,利用陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞制備腹水單抗并測(cè)定其效價(jià),通過(guò)Western-blot和單抗中和試驗(yàn)分析了rChIFN-γ與單抗之間的特異性。對(duì)單抗IgG進(jìn)行了HRP,FITC及生物素標(biāo)記,測(cè)定了三種標(biāo)記單 抗的效價(jià)。在測(cè)定原核表達(dá)rChIFN-γ的濃度和滴定昆蟲細(xì)胞表達(dá)rChIFN-γ的抗病毒的活性的基礎(chǔ)上,建立了雞γ-干擾素的定量ELISA檢測(cè)方 法。通過(guò)ConA刺激SPF雞脾淋巴細(xì)胞產(chǎn)生了IFN-γ,并利用FITC標(biāo)記的單抗對(duì)其進(jìn)行了初染。 通過(guò)以上試驗(yàn)獲得了一株能夠穩(wěn)定分泌抗雞γ-干擾素單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,該株單抗命名為G1株,其腹水效價(jià)為1:1×105。Western- blot分析和單抗中和試驗(yàn)表明抗原抗體之間有很好的特異性;對(duì)單抗IgG進(jìn)行HRP,FITC及生物素標(biāo)記效價(jià)分別達(dá)到 1:5000,1:100,1:5000。利用純化的單抗對(duì)原核表達(dá)rChIFN-γ建立的定量ELISA,其回歸方程為 y=2.2742*x+0.105,回歸系數(shù)R=0.975,zui低檢測(cè)濃度為15ng/ml,批內(nèi)變異系數(shù)和批間變異系數(shù)均小于10%。利用昆蟲細(xì)胞表達(dá) rChIFN-γ建立的定量ELISA,其回歸方程為y=0.1164*x-0.1281,回歸系數(shù)R=0.9539。ICC初染結(jié)果為按10μg/ml 的ConA刺激雞脾淋巴細(xì)胞,分泌的雞IFN-γ的陽(yáng)性率為1.71%。 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)制備的抗雞γ-干擾素單克隆抗體性質(zhì)穩(wěn)定,腹水單抗效價(jià)高,利用HRP,FITC及生物素標(biāo)記的單抗IgG的效價(jià)均達(dá)到有效的使用效價(jià)。重組 雞γ-干擾素對(duì)單抗繪制OD值-抗原濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線具有良好的線型關(guān)系,且二者之間具有較好的特異性、重復(fù)性和穩(wěn)定性。ICC初染試驗(yàn)表明本實(shí)驗(yàn)制備的單抗 能夠與天然的雞γ-干擾素發(fā)生特異性反應(yīng)。

上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司代理銷售干擾素Elisa試劑盒，種類繁多，請(qǐng)致電我司業(yè)務(wù)員了解您所需要的產(chǎn)品，并索要說(shuō)明書。感謝您的關(guān)注，祝您生活愉快！