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13817140470更新時間:2018-03-12 瀏覽次數(shù):2665
谷氨酰胺不僅可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源,而且參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。許多商品化細(xì)胞培養(yǎng)基都不含谷氨酰胺。谷氨酰胺作為一種添加劑,常常是在培養(yǎng)基使用之前,再臨時加進(jìn)去,這是什么原因呢?
原來,谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)基中會發(fā)生自發(fā)分解。細(xì)胞培養(yǎng)基的儲存溫度越高,存放時間越久,谷氨酰胺分解的越快。谷氨酰胺分解后還導(dǎo)致氨的形成,而氨對于細(xì)胞具有毒性。
曾有人做過測試,添加了8mM谷氨酰胺的DMEM,在37℃存放7天后,谷氨酰胺的濃度就下降為原先的一半。這也是為什么含谷氨酰胺的培養(yǎng)基要在2-8℃保存的原因。
又有人檢測過11種商品化培養(yǎng)基中谷氨酰胺的濃度,發(fā)現(xiàn)實際檢測的谷氨酰胺濃度均在標(biāo)示的濃度之下。有人測過4℃下谷氨酰胺的降解速率。也是采用DMEM,培養(yǎng)時添加葡萄糖20mmol/L, 胎牛血清7%,發(fā)現(xiàn)在4℃下,大約32天后,谷氨酰胺即下降為原先濃度的一半。
同時,對于細(xì)胞培養(yǎng)來說,谷氨酰胺并非越高越好。當(dāng)初始濃度低于5mmol/L時,谷氨酰胺的利用率大于80%,且初始濃度越低,利用率越高;隨著初始濃度的升高,谷氨酰胺利用率逐漸降低,當(dāng)大于10mmol/L后,利用率急劇降低。
那么,對于谷氨酰胺的降解,是否有相應(yīng)的解決辦法呢?可以使用谷氨酰胺二肽,如甘氨酰谷氨酰胺、丙氨酰谷氨酰胺等。二肽形式的谷氨酰胺十分穩(wěn)定,不會發(fā)生水解和氨的毒性堆積,又可被細(xì)胞所利用。因細(xì)胞內(nèi)的氨基肽酶能裂解二肽,逐漸釋放細(xì)胞所能利用的丙氨酸和谷氨酰胺。丙氨酸谷氨酰胺的熱穩(wěn)定性解決了在培養(yǎng)基使用時才臨時加入L-谷氨酰胺的問題,允許配好的液體培養(yǎng)基在4℃能放更長時間。
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