大鼠磷脂酶A2T試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：                                                        

50管/48樣

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

ELISA原理實(shí)驗(yàn)條件和技術(shù)要點(diǎn):

在應(yīng)用ELISA時，首先要清楚下面內(nèi)容：1，是檢測抗體還是抗原？2，檢測的結(jié)果是定性還是定量？3，是否需要檢測特異抗體的類型？4，所用抗體/單克隆抗體的親和力怎樣？

（1）檢測抗原  zui常用于檢測抗原的方法是非競爭性的雙抗體夾心法，其次是競爭法。但競爭法在具體實(shí)驗(yàn)中有些困難，特別是檢測微生物的抗原，因?yàn)樾枰獦?biāo)記抗原，這對于某些抗原是很難做到的，甚至是不可能的。另外在競爭法中，酶標(biāo)記的抗原與標(biāo)本直接混合在一起，許多標(biāo)本中含有酶抑制劑或蛋白A樣物質(zhì)，可影響ELISA的結(jié)果。

（2）檢測抗體  檢測抗體種類常用的方法是檢測抗體種類的捕獲法，這個方法常用于檢測特異性IgG、IgA和IgM.。這個方法的*步是捕獲所需要檢測的一個種類的抗體，接下來是檢測捕獲的抗體是否是特異性抗原的抗體。間接ELISA在檢測IgG時比較簡單，但不適用于檢測其他種類的抗體，因?yàn)檠逯腥绻刑禺?/span>IgG存在將與IgM或IgA等競爭結(jié)合抗原。

產(chǎn)品種類豐富：涵蓋了百余種細(xì)胞因子類ELISA試劑盒, 重組細(xì)胞因子類蛋白（四千多種之多）及相關(guān)的多達(dá)250余種單克隆、多克隆抗體； 其產(chǎn)品*可滿足科研的需要。

質(zhì)量穩(wěn)定可靠：其提供的試劑盒具有準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好、特異性高等特點(diǎn)。

大鼠磷脂酶A2T試劑盒操作步驟

1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.         加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.         溫育：操作同3。

8.         洗滌：操作同5。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.     測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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