一、“魚雌二醇Elisa試劑盒"詳細(xì)參數(shù)
【檢測方法】：酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
【產(chǎn)品性狀】：96T/48T，盒裝液體(兩種統(tǒng)一規(guī)格)
【貯藏條件】：2-8°C
【產(chǎn)品有效期】：二年，我公司Elisa試劑盒均為批次，可放心購買。
【產(chǎn)品主要成分】：酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。
【種屬】馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
【產(chǎn)品單價】（具體折扣），可免費代測，含稅含運費。
【標(biāo)本】血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等
注：標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。
二、“魚雌二醇Elisa試劑盒"的四大特性
1．特異性強(qiáng)：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
2．重復(fù)性好：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
3．穩(wěn)定性高：實驗效果很穩(wěn)定。
4．超靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品，稀釋度和樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
三、“試劑盒"具體操作方法
以雙抗體夾心法為例展示：
1、雙抗體夾心法檢測抗原        
操作步驟如下：
1）將特異性抗體與固相載體結(jié)合，形成固相抗體。洗滌除去尚未結(jié)
合的抗體及一些雜質(zhì)。
2）加入待測標(biāo)本，保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3）加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。
4）加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色，測知標(biāo)本中抗原的量。在臨床檢驗中，此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如 HBeAg、HBsAg、hCG 、AFP等。只要獲得針對受檢抗原的特異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標(biāo)所使用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應(yīng)用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一起保溫反應(yīng)，作一步檢測。
在一步法測定中，當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成"夾心復(fù)合物"。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象，此時反應(yīng)后顯色的吸光值（位于抗原過剩帶上）與標(biāo)準(zhǔn)曲線（位于抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測讀，所得結(jié)果將低于實際的含量，這種現(xiàn)象被為鉤狀效應(yīng)（hook effect），因為標(biāo)準(zhǔn)曲線到達(dá)高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時，反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法試劑測定標(biāo)本中含量可異常增高的物質(zhì)（例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等）時，應(yīng)注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。
四、樣本處理五部曲
Elisa試劑盒樣本前處理是酶聯(lián)免疫試驗中關(guān)鍵的一步，稍有不慎將導(dǎo)致實驗滿盤皆輸，如何安全，快捷的處理樣本，樣本處理五部曲助您精彩實驗。
1 均質(zhì)
組織樣本:肉、肝食品類切細(xì)，用絞肉機(jī)反復(fù)絞碎，混合均勻。
水產(chǎn)樣本：去除樣品的非食用部分，食用部分切細(xì)，用均質(zhì)器均漿；原料表面較臟時,需適當(dāng)用蒸餾水清洗。
蛋類：鮮蛋去殼，蛋黃和蛋白充分混勻。
水果、蔬菜類：先用水洗去泥沙，然后除去表面的水分，取食用部分。
2 振蕩提取
 將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部，提取待測組分。
2.1振蕩方式：振蕩器上進(jìn)行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。
2.2 在組織樣本中加入有機(jī)溶劑之間提取時，應(yīng)邊加邊振蕩，防止組織凝結(jié)成團(tuán)，不利于提取。
3. 在用有機(jī)溶劑提取過程中，如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，解決的方法有：①用細(xì)頭輕輕的攪拌，破壞乳化后，再重復(fù)離心。②再加入適量的提取劑，重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。
4 濃縮
 由于凈化過程中引入的溶劑，可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析，需要去除全部有機(jī)溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮氣下吹干，再用復(fù)溶液溶解干燥殘留物。
濃縮方式：
 氮氣吹干除雜、壓縮空氣吹干除雜。
注意：
1在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，防止雜質(zhì)干擾。
2在吹樣本時，針頭應(yīng)在液面上空，避免與樣本接觸，防止產(chǎn)生交叉污染。
3樣本吹干后應(yīng)立即取下，避免吹的時間過長，影響zui終檢測結(jié)果。
4不同的藥物，吹干后樣本的保質(zhì)期不同，提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。
5 凈化
 經(jīng)過提取的待測組分中通常含有一些會干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測組分與雜質(zhì)分離的過程，我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的zui常見的凈化是：液液分配法。
 比如：用復(fù)溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷，在加入正己烷和復(fù)溶液渦動后如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，可以60℃水浴加熱，至乳化現(xiàn)象消失或減弱后，加大離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心。
五、判定結(jié)果計算
對于新入行不久，對ELISA的結(jié)果分析這塊不太熟悉?？蛻舻膶嶒炇峭ㄟ^人源的蛋白作為抗原，兔源多克隆抗體作為一抗（我們就是為了通過做ELISA來檢測其效價），然后通過辣根過氧化物作為二抗及顯色組分。實驗做完了，但不知道怎么分析結(jié)果，例如標(biāo)準(zhǔn)曲線怎么做之類的。另外，還想問一下，有沒有實用的軟件可用來分析。對于客戶的問題回答：

間接ELISA要是試劑盒，會有標(biāo)準(zhǔn)品的，把標(biāo)準(zhǔn)品按一定濃度梯度稀釋一塊兒做（一般有三個重復(fù)），zui后酶標(biāo)儀或分光光度計比色，用軟件（oringe）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，的出公式，按公式將樣品帶入公式，
用于ELISA結(jié)果計算zui方便的是logit曲線。曲線的橫坐標(biāo)用標(biāo)樣各濃度（ng/ml 或其他單位）的自然對數(shù)表示，縱坐標(biāo)用各濃度顯色值的logit值表示。Logit值的計算方法如下：
                      B/B0         B
    Logit（B/B0）=ln———— =ln————
                     1-B/B0      B0-B
    其中B0是0ng/ml孔的顯色值，B是其它濃度的顯色值。

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