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試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被總甲狀腺激素(TT4)抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總甲狀腺激素(TT4)呈正相關。

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