勁馬講述酶標(biāo)板的度及線性標(biāo)準(zhǔn)
　　
　　上海勁馬在免疫學(xué)檢測(cè)中，酶標(biāo)板的檢測(cè)性和保證酶標(biāo)板性的濃度范圍，是決定使用哪種酶標(biāo)板品牌的非常重要因素。本實(shí)驗(yàn)采用商業(yè)化的ELISA實(shí)驗(yàn)方法來(lái)分析比較11種不同品牌的酶標(biāo)板的性和線性范圍。實(shí)驗(yàn)證明在所有測(cè)試的酶標(biāo)板中，NuncMaxiSorp酶標(biāo)板具有zui廣的線性范圍（4-2000pg待測(cè)蛋白/mL）。MaxiSorp酶標(biāo)板也顯示出了良好的重復(fù)性，另外100%的MaxiSorp酶標(biāo)板的R2超過(guò)0.99，因此它在所有測(cè)試的不同品牌的酶標(biāo)板中具有zui的結(jié)果。
　　
　　縮寫B(tài)SA：牛血清白蛋白ELISA：酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定HRP：辣根過(guò)氧化物酶O.D.：吸光值PBS：磷酸鹽緩沖液TNF-alpha：人腫瘤壞死因子a
　　
　　在定量實(shí)驗(yàn)中例如酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA），不僅了解待測(cè)試劑的zui小濃度是非常重要的，而且酶標(biāo)板的性及保持測(cè)試性的濃度范圍也同樣重要。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）中常使用一次性多孔板，而聚苯乙烯板的特性可能改變?cè)噭┡c固象部分的結(jié)合方式。這也反過(guò)來(lái)影響酶標(biāo)板在不同反應(yīng)物濃度時(shí)的性。保證酶標(biāo)板準(zhǔn)確度的濃度范圍（線性范圍）和線性曲線的重復(fù)性，是客戶選擇酶標(biāo)板品牌著重考慮的因素。下面的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）實(shí)驗(yàn)中，我們考察了NuncMaxisorp和其它競(jìng)爭(zhēng)品牌酶標(biāo)板的準(zhǔn)確性和線性范圍。
　　
　　實(shí)驗(yàn)方法用商業(yè)化ELISA試劑盒中的稀釋液來(lái)準(zhǔn)備包被試劑：將0.1ml的捕獲抗體溶液（稀釋至4μg/mL）加入酶標(biāo)板的每孔中，密封酶標(biāo)板，室溫下放置過(guò)夜。重復(fù)洗酶標(biāo)板3次，每個(gè)孔中加入0.3mL封閉液（10g/L溶于PBS的牛血清白蛋白溶液），撫育一小時(shí)，重復(fù)上述沖洗步驟。用稀釋液將人腫瘤壞死因子a以1：2梯度稀釋，濃度從2000pg/mL到2pg/mL。靈敏度測(cè)試用來(lái)考察每個(gè)品牌的zui小可檢測(cè)濃度。人腫瘤壞死因子a濃度。加0.1mL的人腫瘤壞死因子a至每個(gè)孔中，室溫下?lián)嵊?小時(shí)。重復(fù)上述沖洗步驟，加0.1mL抗體（稀釋到250ng/mL）至每個(gè)孔中，室溫下?lián)嵊?小時(shí)。重復(fù)上述沖洗步驟，加入0.1mL的辣根過(guò)氧化酶-鏈霉親和素溶液（1:200稀釋）至每孔中，室溫下?lián)嵊?0分鐘。經(jīng)過(guò)zui后一次沖洗后，每孔加入0.1mL的顯色劑，反應(yīng)20分鐘后立即加入0.05mL的終止液。要控制顯色反應(yīng)時(shí)間，以保持每個(gè)酶標(biāo)板的一致性。用分光光度計(jì)讀取每塊酶標(biāo)板在波長(zhǎng)492nm下的吸光值，間隔5nm，100ms延時(shí)，300ms測(cè)試時(shí)間。檢測(cè)閾值的計(jì)算方式為整板的空白孔（不加人腫瘤壞死因子a）的平均OD值加上兩倍的標(biāo)準(zhǔn)偏差。以檢測(cè)到超過(guò)閾值吸光度所對(duì)應(yīng)的zui小抗原濃度來(lái)評(píng)價(jià)酶標(biāo)板的靈敏度。通過(guò)線性范圍測(cè)定來(lái)確定每塊微孔板保持測(cè)量性的濃度范圍。按以上步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，所用的酶標(biāo)板檢測(cè)結(jié)果如表3所示，每一縱欄的吸光值（吸光值=測(cè)得的吸光值-空白孔吸光值），取重復(fù)孔平均值作為每板的數(shù)值。用Excel制作對(duì)數(shù)坐標(biāo)的劑量-效應(yīng)曲線，并計(jì)算出的R2，以此來(lái)評(píng)價(jià)每塊板的線性結(jié)果。