Elisa實(shí)驗(yàn)中牛奶樣本收集方法

ELISA技術(shù)的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。

牛奶和奶粉前處理方法

（a）牛奶前處理方法

┅┅取牛奶樣本，3000g以上，10℃離心10min，吸除上層脂肪；

┅┅取5ml去除脂肪牛奶樣本至10ml聚苯乙烯離心管中，加入150ulC液（見配液1）出現(xiàn)沉淀，振蕩15s，再加入150ulD液（見配液2），振蕩1min充分混合；

┅┅3000g以上，15℃離心10min，移取上層液；

┅┅用復(fù)溶工作液（見配液6）以等體積稀釋上層液（1份上層液+1份復(fù)溶工作液）；

┅┅取50ul用于分析。

注：如果離心后仍然渾濁，再重復(fù)脫脂過程。   

（b）牛奶前處理方法

┅┅取牛奶樣本,3000g以上,10℃離心10min,吸除上層脂肪；

┅┅取5ml去除脂肪牛奶樣本至10ml聚苯乙烯離心管中，加入250ulC液（見配液1）和250ulD液（見配液2）充分混合，3000g以上，4～12℃離心10min。（如沒有冷凍離心機(jī)，請(qǐng)預(yù)先將樣本冷卻到8℃再進(jìn)行離心）；

┅┅移取2.2ml上層液（相當(dāng)于2ml奶樣）至另一個(gè)10ml聚苯乙烯離心管中，加入4ml乙酸乙酯上下振蕩10min；

┅┅3000g以上，室溫（20-25℃）離心10min ；

┅┅移取2ml乙酸乙酯上層有機(jī)相（相當(dāng)于1ml奶樣），至10ml干凈的玻璃試管中，于50～60℃水浴氮?dú)饬飨麓蹈桑?/span>

┅┅加入0.5ml復(fù)溶工作液（見配液6），渦動(dòng)2min溶解干燥的殘留物；

┅┅取50ul用于分析。

由于陰性樣本可能會(huì)產(chǎn)生背景干擾 （在某些情況下干擾數(shù)值在標(biāo)準(zhǔn)2到3之間），所以推薦0.15ppb作為陽性結(jié)果的cut off判斷值。