建立間接的ELISA方法適合己烯雌酚樣本快速檢測(cè)

己烯雌酚（diethylstibestrol, DES）是一種人工合成的雌激素,在促進(jìn)動(dòng)物蛋白質(zhì)的合成代謝、提高動(dòng)物日增重和減少脂肪等方面效果明顯,因此一直被作為一種動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑用于畜禽以及水產(chǎn)品養(yǎng)殖中。癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）研究發(fā)現(xiàn),DES是一種致癌物質(zhì),能夠在動(dòng)物源性食品如肝臟、肌肉、蛋、奶中殘留,并通過食物鏈危害人體健康。因此世界各國(guó)規(guī)定食品動(dòng)物養(yǎng)殖中不得以任何途徑和方式使用DES,養(yǎng)殖動(dòng)物及動(dòng)物性食品中不得檢出DES。 本論文針對(duì)DES的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),設(shè)計(jì)并合成了DES半抗原和人工抗原,并對(duì)DES半抗原和人工抗原進(jìn)行了表征和鑒定,制備出了己烯雌酚的高質(zhì)量的多克隆抗體,應(yīng)用間接ELISA方法和Western Blot測(cè)定了抗體的特異性,建立了己烯雌酚的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法以及相應(yīng)的樣品提取方法,并且用HPLC方法對(duì)ELISA檢測(cè)方法的精密度和準(zhǔn)確度進(jìn)行了驗(yàn)證。 本文分兩部分,*部分對(duì)己烯雌酚進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾,用有機(jī)合成方法合成了己烯雌酚-單-羧基丙基-醚（DES-MCPE）和己烯雌酚半琥珀酸（DES-HS）,并通過紅外、質(zhì)譜和核磁共振對(duì)合成產(chǎn)物進(jìn)行了鑒定之后分別將己烯雌酚衍生產(chǎn)物利用優(yōu)化的混合酸酐法、碳二亞胺法與牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OVA）偶聯(lián),分別作為免疫抗原及包被抗原,并且通過紫外掃描光譜、SDS-PAGE電泳試驗(yàn)驗(yàn)證偶聯(lián)效果。 第二部分,以合成的DES-HS-BSA, DES-MCPE-BSA免疫新西蘭大白兔得到抗血清,優(yōu)化抗體純化條件,得到DES抗體,應(yīng)用Western Blot和間接ELISA法驗(yàn)證了抗體的特異性；探討了間接ELISA測(cè)定DES抗體的條件；并對(duì)DES抗體與游離DES的特異性結(jié)合反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定。采用碳二亞胺法連接的DES-HS-BSA作為免疫原得到的抗體進(jìn)行間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA實(shí)驗(yàn),優(yōu)化了ELISA工作條件,建立了間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)DES方法。方陣滴定法確定*OVA-HS-HSA包被抗原的濃度為2.5μg/mLDES-HS-BSA,酶標(biāo)二抗（羊抗兔IgG-HRP）工作濃度為1：7500以及抗體的工作濃度為1：6400。以上述試驗(yàn)條件為基礎(chǔ),以系列稀釋的DES標(biāo)準(zhǔn)溶液作為檢測(cè)對(duì)象,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到的線性回歸直線方程為y=-2.6679x+3.0589,相關(guān)系數(shù)R2=0.9969,從標(biāo)準(zhǔn)曲線可以得知,此方法可測(cè)定的zui適范圍為Ong/mL～100ng/mL,zui小檢測(cè)限約為8.4ng/mL。本實(shí)驗(yàn)所建立的ELISA方法的度以批內(nèi)誤差表示,結(jié)果表明孔間差異2.57%（n=5）,度較好。在可測(cè)定濃度范圍內(nèi)己烯雌酚（DES）抗體與其他二苯乙烯類激素免疫交叉反應(yīng)較小,在添加回收實(shí)驗(yàn)中,對(duì)豬肉樣本在10ng/mL,50ng/mL,100ng/mL三個(gè)濃度的平均回收率為109.41%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明所建立的間接ELISA方法有較高特異性和選擇性,適合己烯雌酚藥物殘留樣本快速檢測(cè)。

上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司是一家專業(yè)經(jīng)營(yíng)胎牛血清,特級(jí)胎牛血清,優(yōu)級(jí)胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,進(jìn)口胎牛血清,ELISA試劑盒,進(jìn)口ELISA試劑盒,ELISA檢測(cè)試劑盒專賣的公司。
    我司主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)及銷售，并代理銷售二十多個(gè)國(guó)外，致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供*的科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù)，滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué) 、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生物科技實(shí)驗(yàn)需求。 
    公司主營(yíng)產(chǎn)品：胎牛血清,特級(jí)胎牛血清,優(yōu)級(jí)胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,進(jìn)口胎牛血清,ELISA試劑盒,進(jìn)口ELISA試劑盒,ELISA檢測(cè)試劑盒,抗體,標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)照品,培養(yǎng)基等科研試劑。
    為了中國(guó)生命科學(xué)事業(yè)的騰飛，我們?nèi)σ愿埃?/span>